ساب کلونینگ ژن آنزیم سوپراکسید دیسموتاز 1 انسانی(hsod1) در سلول های استرومایی مغز استخوان موش صحرایی و ارزیابی بیان وفعالیت آن در محیط کشت
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس - دانشکده علوم پزشکی
- نویسنده محسن عابدی
- استاد راهنما محمد تقی طریحی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1390
چکیده
سلول های استرومایی مغز استخوان (bmscs) نوعی سلول های بنیادی بالغ با قدرت تمایز بالا هستند. bmscs می توانند به سلول هایی با منشأ مزودرمی و غیرمزودرمی تمایز پیدا کنند که با توجه به قابلیت دسترسی این سلول ها منبع مناسبی از سلول های بنیادی بالغ جهت تولید سلول های پایدار و سلول درمانی می باشند. در مطالعه حاضر این سلول ها با استفاده از ژن آنزیم سوپراکسید دیسموتاز1 انسانی ترانسفکت شدند و در ادامه میزان بیان پروتئین و همچنین میزان فعالیت آنزیم سنجیده شده است.پرایمرهای اختصاصی دارای توالی های آنزیمی hindiii و xhoi برای ژن hsod1 از پلاسمید pincy-hsod1 طراحی و تکثیر و تایید این ژن انجام شد. قطعه های تکثیر شده توسط pcr، در کلونینگ وکتور ترشحی psectag2/hygrob ساب کلون شدند و با روش های کلونی-pcr و هضم آنزیمی تایید گردیدند. در ادامه برای انجام کارهای سلولی تحت شرایط استریل سلولهای bmsc از استخوان ران موش های صحرایی بالغ استخراج شد.سپس با استفاده از روش های ایمنو سایتوشیمی وبا استفاده از آنتی بادی فیبرونکتین و cd45 ماهیت استرومایی این سلول ها تایید شد. برای انجام ترانسفکشن پاساژ سوم این سلول ها را با استفاده از معرف توربوفکت در معرض وکتور نوترکیب ساخته شده قرا می دهیم.با روش های rt-pcr و real time pcr به صورت کمی بیان ژن ارزیابی شد و در مرحله بعد با استفاده از آنتی بادی منوکلونال و اختصاصی انسانی بیان در سطح پروتئین با روش وسترن بلات انجام شد.در نهایت برای ارزیابی فعالیت آنزیمی با کمک کیت ارزیابی آنزیم sod فعایت آنزیم سنجیده شد که فعالیت آنزیمی 0.0402 به عنوان درصد مهار آنزیم، با توجه به دستورالعمل موجود در کیت حاصل شد. : با توجه به کاربرد متعدد سلول های بنیادی می توان با استفاده از ژن آنزیم سوپراکسید دیسموتاز1 انسانی که در تحقیقات بالینی کاربرد های مفیدی را برای آن ذکر کرده اند، سلول های پایداری که قابلیت تولید این آنزیم را داشته باشند تولید کرد. در این پژوهش سلول های پایدار مذکور تولید شده است که قابلیت استفاده در تحقیقات بالینی بعدی را دارد.
منابع مشابه
بررسی آثار کامپوزیت ژلاتین– کیتوسان بر کشت سلول های استرومایی مغز استخوان موش صحرایی
مقدمه: ژلاتین و کیتوسان به عنوان بیوپلیمرهای زیست سازگار و زیست تخریب پذیر شناخته شده اند. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثرات غشاء ژلاتین- کیتوسان بر روی زنده ماندن، تکثیر، مرگ و تمایز سلول های استرومایی مغز استخوان موش صحرایی می باشد. روش بررسی: در این مطالعه ابتدا فیلم کامپوزیتی ژلاتین- کیتوسان به وسیله قالب گیری مخلوط این دو پلیمر در اسیداستیک گلاسیال تهیه شد. پس از اینکه سلول های bmsc به مرحله ...
متن کاملبررسی آثار کامپوزیت ژلاتین– کیتوسان بر کشت سلولهای استرومایی مغز استخوان موش صحرایی
Introduction: Gelatin and Chitosan are known as biodegradable and biocompatible biopolymers. These biopolymers have recently received increasingly more attention for tissue engineering. The aim of this study was to survey of effects of Gelatin-Chitosan film in viability, proliferation, apoptosis and differentiation on bone marrow stromal cell (BMSCs) culture in rat. Methods: Fist, gelatin- chi...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملساب کلونینگ ژن ngf در وکتورترشحی psectag۲/hygro و بیان آن در سلول های ردۀ pc۱۲
مقدمه: ساب کلونینگ ژن های اختصاصی در پلاسمیدها و انتقال آن ها به سلول های هدف به منظور تولید پروتئین های درمانی یا تمایز سلول به عنوان یکی از مؤثرترین روش های درمان برای بیماری های مختلف پیشنهاد می شود. فاکتور رشد عصب (ngf) یکی از اعضای خانواده نوروتروفین ها است. نوروتروفین ها خانواده ای از پروتئین ها هستند که میزان بقاء، تمایز و عملکرد انواع مختلف نورون ها را تنظیم می کنند. مطالعات نشان دادندک...
متن کاملارزیابی لانه گزینی سلول های بنیادی مزانشیمی در مغز استخوان موش صحرایی پس از تزریق سیستمیک
سابقه و هدف: مطالعه حاضر به منظور ارزیابی امکان لانه گزینی سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان موش های صحرایی نر پس از پیوند آلوگرافت آنها در مغز استخوان موش های صحرایی ماده پرتو دیده و سالم صورت پذیرفته است. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی از 65 سر موش صحرایی بالغ در 13 گروه (1 گروه سالم و 12 گروه پرتو دیده) استفاده شد. ابتدا سلول های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان ران موش های صحرا...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس - دانشکده علوم پزشکی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023